(一)操作室厌氧环境形成：

1. 按使用要求放置好必要的附件和器具；

2. 通电源开照明灯，开温控仪，调节所需温度；

3. 操作室内放入1000g钯粒(封闭)和500g干燥剂，并放入美兰指示纸(封闭)；

4. 关紧取样室内外门，并抽真空校验；

5. 操作室内第一次置换(氮气置换)：

A. 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧

B. 接通氮气进气路，打开氮气控制阀1，使手套鼓起，关闭阀门1，然后扎紧袋口；

6. 操作室第二次置换(氮气置换)重复一次充氮过程，取样室先抽真空，并注意随时用脚踏开关开闭排气。如此连续三次氮气置换。

7. 操作室第四次置换(混合气体置换)：

(混合气体配比为N2 85%、H2 5%、CO10%)

A. 调换气路打开混合气阀3进气，充气时取样室先抽真空，并随时用脚踏开关开闭排气；

B. 关掉混合气体阀3，并打开阀5，使混合气体经过流量计，调整流量计，流量为每分钟10ml左右；

C. 混合气体重复2-3次转换，经过上述过程，基本形成厌氧环境。

8. 操作室内打开粑粒除氧剂，接通除氧催化器电源进行催化除氧，一小时后打开美兰指示纸观察其变色情况，不变色为操作室内达到厌氧环境；

9. 开紫外线灭菌灯，室内进行灭菌处理，灭菌时间按具体实验自定。

厌氧培养箱的使用注意事项
1.仪器尽可能地安装于空气清净、温度变化较小的地方;
2.开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的使用说明，掌握正确使用方法;
3.培养物放入必须是在操作室内达到厌氧环境后放入;
4.如发生故障（停气等原因）操作室内仍可保持10小时厌氧状态（超过10小时则根据需要把培养物取出另作处理）;
5.经常注意气路有无漏气现象;
6.调换气瓶时，注意要扎紧气管，避免流入含氧气体。
7. 真空泵按要求使用，定期检查加油。