广州东盛生物科技有限公司 2016-11-23 我要投稿>

导读:实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

SYBR Green qPCR Mix (Rox+)

实时荧光定量PCR所使用的荧光物质可分为两种:荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下:

  1.TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。

  2.SYBR荧光染料:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料非特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR仅与双链DNA进行结合,因此可以通过溶解曲线,确定PCR反应是否特异。

  3.分子信标:是一种在5和3末端自身形成一个8个碱基左右的发夹结构的茎环双标记寡核苷酸探针,两端的核酸序列互补配对,导致荧光基团与淬灭基团紧紧靠近,不会产生荧光。PCR产物生成后,退火过程中,分子信标中间部分与特定DNA序列配对,荧光基因与淬灭基因分离产生荧光。

  方法 优点 缺点 适用范围

  SYBR Green I 适用范围广、灵敏、方便、便宜 引物要求高、易出现非特异性条带 科研中对多个目的基因定量分析,基因表达量的研究

  Taq Man 特异性高、重复性好 价格高、只适合特定目标 病原体检测、疾病耐药基因研究、药物疗效考核、遗传疾病诊断

  分子信标(HRM) 特异性极高、区分度高 对仪器及试剂要求极高 种系的差异研究、SNP等单碱基突变研究

  本文要介绍的是广州东盛生物最新研发的SYBR Green qPCR Mix,本制品中的DNA聚合酶是一种改良后的Taq DNA聚合酶,结合最新开发Buffer系统,可以有效抑制非特异性PCR扩增,大大提高PCR扩增灵敏度,同时,在反应体系中添加了Rox内参染料,可校正不同孔间的荧光信号误差,适用于进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。本制品适合于快速Real Time PCR扩增反应,可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对靶基因进行准确定量、检测,重复性好,可信度高。

  Rox+染料是一种不参与PCR反应的荧光染料,最大吸收波长约为576nm,最大发射波长约为601nm,其主要作用是校正上样量误差和每个孔的荧光信号经过滤光片,再经过聚焦到CCD的光程差异。

  产品特点

  ? 特异性高:热启动功能与优化缓冲液可防止非特异性扩增和形成引物二聚体

  ? 敏感性:可检测低拷贝模板

  ? 线性范围广:可精确定量9个数量级

  ? 通用性好:几乎兼容所有实时荧光定量PCR仪

  ? 可重复性、使用方便:即用型2×Mix,减少加样错误和反应体系配置时间

  产品用途

  ? 实时PCR(使用SYBR®GreenⅠ)

  ? 实时RT-PCR(使用SYBR®GreenⅠ)

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